Elektroforéza: Rozdiel medzi revíziami
Smazaný obsah Přidaný obsah
d nahradenie textu |
typo, replaced: 20-100 → 20 – 100, zbytk → zvyšk, replaced: N,N → N, N |
||
Riadok 4:
Sila ''F<sub>e</sub>'', ktorou pôsobí elektrické pole o intenzite ''E'' na ión s [[náboj]]om ''q'' je vyjadrená rovnicou <math>\boldsymbol{F_e}=q\boldsymbol{E}</math>. Opačným smerom pôsobí frikčná sila <math>\boldsymbol{F_f}=v \cdot f</math>, kde ''v'' je rýchlosť migrujúceho iónu a ''f'' tzv. frikčný koeficient, ktorý vyjadruje mieru, ktorou je ión unášaný roztokom a závisí na veľkosti, tvare a stave [[solvatácia|solvatácie]] iónu, ako aj na viskozite roztoku. V konštantnom elektrickom poli sú sily vyrovnané: <br>
: <math> {v \cdot f}={q \cdot E} </math>,
takže každý ión sa pohybuje svojou charakteristickou rýchlosťou a je definovaný tzv. elektroforetickou mobilitou ''μ'': <br>
: <math> {\mu} = {v \over E}={q \over f} </math
Táto rovnica však platí len obmedzene, pre nekonečne zriedené [[roztok]]y iónov a nevodivé [[rozpúšťadlo|rozpúšťadlá]]. Veľké ióny, ako proteíny, sú v skutočnosti obklopené solvatačnou vrstvou, ktorá vytvára dodatočné elektrické pole ovplyvňujúce jeho mobilitu. Pohyblivosť iónov s acidobázickými vlastnosťami je navyše ovplyvnená [[pH]] roztoku <ref name=Voet/>.
Riadok 13:
=== Papierová elektroforéza ===
Pre prevedenie papierovej elektroforézy je vzorka nanesená do malého pásu filtračného papieru, ktorého oba konce sú ponorené do roztokov [[elektróda|elektród]] o opačnej polarite. Po aplikácii elektrického poľa sa ióny pohybujú v závislosti od veľkosti ich náboja (
=== Gélová elektroforéza ===
Riadok 27:
Po rozdelení proteínov v elektrickom poli je potrebné ich nafarbiť. Najpoužívanejšie farbivo je Coomassie brilliant blue, ktoré vytvára komplex s proteínom. Gél je najprv máčaný v alkoholovom alebo kyslom roztoku tohto farbiva, čím sa nafarbí celý gél. Následne je nadbytočné farbivo odstránené máčaním gélu v kyslom roztoku, takže nakoniec ostanú nafarbené len proteíny. Coomassie brilliant blue umožňuje detegovať proteíny v množstve do 0,1 μg. <br>
Približne 50x citlivejšou metódou je farbenie striebrom, jeho aplikácia je však náročnejšia. Alternatívnym farbivom je fluorescamín, ktorý reaguje s primárnymi amínovými
=== Kapilárna elektroforéza ===
Hoci je gélová elektroforéza bežná a veľmi efektívna metóda, na jej prevedenie je potrebná minimálne hodina času a je náročná na kvantifikáciu a automatizáciu. Tieto problémy boli prekonané technikou kapilárnej elektroforézy, v ktorej sa proteíny delia vo veľmi tenkej (v priemere 20
== Separácia DNA ==
| |||